本研究針對(duì)豬肉中多種獸藥殘留同時(shí)檢測(cè)的目的，開(kāi)發(fā)了經(jīng)過(guò)優(yōu)化的固相萃取前處理方法和HPLC分析方法。待測(cè)物質(zhì)為主要的抗生素獸藥種類中具有代表性的化合物，包括磺胺類、四環(huán)素類、喹諾酮類、氯霉素類。

二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物

麻保沙星  (CAS:115550-35-1)，雙氟沙星（CAS:98106-17-3），土霉素（CAS:79-57-2），氟苯尼考（CAS:73231-34-2），磺胺多辛（CAS:2447-57-6），磺胺間二甲氧嘧啶（CAS:155-91-9），氯霉素（CAS:56-75-7）。

三、應(yīng)用范圍

本方法適用于豬肉中多種獸藥殘留的檢測(cè)的HPLC檢測(cè)及確證。

四、實(shí)驗(yàn)材料

SimplyGreen HLB 固相萃取柱60mg/3mL。

五、實(shí)驗(yàn)步驟

1、樣品提取

準(zhǔn)確稱取豬肉3 g于50 mL離心管中，加入0.1 mol/L的EDTA-Mcllvaine溶液15 mL，漩渦搖勻1 min，冰水浴超聲10 min，控制樣品溫度<15 ℃；5000 r/min離心8 min。取上清液，重復(fù)提取一次，合并清液、快速濾紙過(guò)濾，備用。

2、SPE柱凈化

(1)活化：HLB固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3 mL水活化 。
(2)上樣和洗脫：在HLB固相萃取柱上加入10 mL備用樣液，棄去流出液，用3 mL 5%甲醇水溶液（v/v）淋洗，棄去淋洗液，抽干小柱；用8 mL甲醇-乙酸乙酯溶液（1:9，v/v）洗脫，收集洗脫液（整個(gè)上樣、洗脫過(guò)程保持流速2 mL/min） 。
(3)重新溶解：洗脫液40 ℃氮吹吹干，1 mL甲醇定容，過(guò)0.45 μm 濾膜，上機(jī)測(cè)試。

3、HPLC條件

設(shè)  備：Waters Alliance 2695
色譜柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm, 5 μm )
檢測(cè)器 ：Waters 2487 紫外檢測(cè)器
流動(dòng)相 ：A：乙腈  B： 0.1%甲酸水溶液（v/v）
洗脫方式：梯度洗脫
表1  梯度洗脫條件